液相色譜熒光檢測(cè)器(FLD)是一種高靈敏度、高選擇性的檢測(cè)器，適用于能產(chǎn)生熒光的化合物或經(jīng)衍生化后發(fā)光的物質(zhì)。其核心優(yōu)勢(shì)在于靈敏度可達(dá)紫外檢測(cè)器的很多倍，且抗干擾能力強(qiáng)。
熒光檢測(cè)器的工作機(jī)制基于光致發(fā)光現(xiàn)象，核心步驟如下：
激發(fā)光照射光源(常用氙燈、汞燈或激光二極管)發(fā)射特定波長(zhǎng)的激發(fā)光，通過單色器(光柵或?yàn)V光片)篩選出單一波長(zhǎng)的激發(fā)光束，聚焦于色譜柱的流出液(檢測(cè)池)中。當(dāng)待測(cè)組分分子吸收激發(fā)光能量后，會(huì)從基態(tài)(穩(wěn)定態(tài))躍遷到激發(fā)態(tài)(高能態(tài))。
熒光發(fā)射處于激發(fā)態(tài)的分子不穩(wěn)定，會(huì)在很短時(shí)間內(nèi)(10??～10??秒)通過非輻射躍遷損失部分能量，回到激發(fā)態(tài)的*低振動(dòng)能級(jí)，再通過輻射躍遷釋放出光子，回到基態(tài)，這個(gè)過程產(chǎn)生的光就是熒光。熒光的波長(zhǎng)總是大于激發(fā)光波長(zhǎng)(斯托克斯位移)，這是熒光檢測(cè)的關(guān)鍵特征。
信號(hào)采集與轉(zhuǎn)換為了避免激發(fā)光的干擾，檢測(cè)器的熒光接收系統(tǒng)(光電倍增管 PMT 或光電二極管)通常與激發(fā)光光路呈 90° 角 放置。發(fā)射的熒光經(jīng)單色器篩選出特征熒光波長(zhǎng)后，被光電檢測(cè)器接收并轉(zhuǎn)換為電信號(hào)。電信號(hào)強(qiáng)度與待測(cè)組分的濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，后經(jīng)放大和數(shù)據(jù)處理，得到色譜峰和定量結(jié)果。
檢測(cè)流程：
激發(fā)光源(如氙燈或激光)發(fā)出連續(xù)光譜，經(jīng)單色器分光后選擇特定波長(zhǎng)作為激發(fā)光。
激發(fā)光照射樣品池中的熒光物質(zhì)，產(chǎn)生熒光。
熒光信號(hào)通過直角方向的光路(避免激發(fā)光干擾)被光敏元件(如光電倍增管)檢測(cè)，并轉(zhuǎn)換為電信號(hào)。
電信號(hào)經(jīng)放大后傳輸至數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，生成色譜圖。
液相色譜熒光檢測(cè)器以其高靈敏度和高選擇性成為痕量分析的重要工具，尤其適用于生物、環(huán)境等領(lǐng)域。然而，其非通用性和對(duì)干擾的敏感性限制了應(yīng)用范圍。通過結(jié)合激光光源、聯(lián)用技術(shù)或衍生化方法，可進(jìn)一步拓展其分析能力，滿足復(fù)雜樣品檢測(cè)需求。
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